Liczenie drożdży

[coder]

Może jak sobie ładnie opiszę procedurę liczenia drożdzy, to się wreszcie za to zabiorę:

 

1. Przygotowanie roztworu drożdzy - gęstwę trzeba rozcieńczyć zwykle 1:1000, żeby nie było za dużo drożdzy w polu mikroskopu.

 

- przygotowyjemy 3 sterylne probówki, w każdej po 9 ml wody. Oznaczamy je 10, 100, 1000.

- do pierwszej przenosimy pipetą 1ml gęstwy, mieszamy. To jest 1:10

- do drugiej przenosimy pipetą 1ml z pierwszej probówki, mieszamy. To jest 1:100

- do trzeciej przenosimy pipetą 1ml z drugiej probówki, mieszamy. To jest 1:1000

 

2. Przygotowujemy błękit metylowy do barwienia martwych komórek:

- odważamy 0.1 grama błękitu i dodajemy wody destylowanej do objętości 100 ml, dostajemy roztwór 0.1%

- przed liczeniem mieszamy 1ml drożdży rozcieńczonych 1:1000 z 1ml roztworu. Ale to chyba nam zwiększy rozcieńczenie do 1:2000 ?

- czekamy 2 minuty - martwe drożdże zabarwią się na ciemnoniebiesko, żywe na jasnoniebiesko

 

3. Liczymy

Potrzebujemy mikroskop 1 do 400, i hemacytometr.

- mieszamy próbkę porządnie

- napełniamy hemacytometr pipetą

- pod mikroskopem widać siatkę 5 na 5 kwadratów, liczymy tylko w 5 kwadratach: 4 narożnych i środkowym. Notujemy też ilość martwych komórek. Nie liczymy komórek przecinających górną i lewą krawędź kwadratu.

 

wzrór na wyliczenie:

Drożdży na ml jest = ilość policzonych komórek * 5 * stopień rozcieńczenia ( zwykle 1000) * 10000

 

Jezeli drożdże nie rozłożyły się równomiernie, liczymy we wszystkich 25 kwadratach, i wtedy nie mnożmy przez 5.

 

żywotność oceniamy jako % = (wszystkie - martwe)/ wszystkie * 100 %

 

Proste? Proste. Do roboty.

[darko]

http://www.pg.gda.pl/chem/Katedry/Leki_Biochemia/dydaktyka/biologia_komorki/zajecia_wstepne.pdf

http://www.pg.gda.pl/chem/Katedry/Leki_Biochemia/dydaktyka/biofizyka/cz7.pdf

Liczenie komórek i oznaczenie żywotności należy wykonać oddzielnie. To drugie można zrobić na zwykłym szkiełku przedmiotowym i policzyć komórki w polu widzenia.