posiewy mikrobiologiczne - rozpoznawanie infekcji

[bnp]

Nie mam zielonego pojęcia. Ezę wykonałem z kawałka drutu miedzianego umieszczonego w drewnianym pędzelku do malowania

[Wiktor]

spróbuj zrobić posiewy w ten sposób: http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/9/90/Streak_plates_3.svg/150px-Streak_plates_3.svg.png

[robkiz]

Mniejsze kółeczko w tej ezie by sie przydalo i/lub rozcienczony roztwor jak pisali koledzy. Specjalista tez nie jestem ale na tyle ile widac 2 i 3 to jest to samo i wyglada jak drozdze wlasnie. Temat zaczyna mnie interesowac bo przyznam sie Wam ze Was podziwiam za checi

[leszcz007]

Czy kolonie 1,2,3 to może być to samo czy są to różnie kolonie ?

przy 1 to ciężko mówić o kolonii

2 i 3 wyglądają na zdjęciu inaczej, ale to jeszcze o niczym nie świadczy, zobaczymy co się dalej z tym będzie działo. Faktycznie przydał by się mikroskop.

Teraz by się przydał pewnie mikroskop. Może coś polecicie w rozsądnej cenie bo jestem chemikiem i nie znam się na takich rzeczach. Jakie powiększenie itp ...

Mikroskop może być jakikolwiek, byle miał obiektyw 100x, na okularze przynajmniej 10x. To pozwoli Ci zobaczyć bakterie. Jednymi z lepszych są Olimpusy, ale tu nie ma mowy o rozsądnej cenie. Poszukaj, może jakieś laboratorium/uczelnia pozbywa się starego sprzętu. Ja kiedyś pożyczałem od Weterynarza

Jakie rozcieńczenie stosować ?

Przy tym co widzę na szalkach to zacznij od rozcieńczenia 100

Edytowane 18 Grudnia 2012 przez leszcz007

[bnp]

Pomagać, pomagać. Co dalej mam zrobić ? Tyle mych pytań zostało bez odpowiedzi.

 

Czego Was na tych studiach uczyli ? Jestem pewny, że są wśród Was ludzie po biologii, biotechnologii itp

Nie chcecie pomagać czy nie wiecie jak to zrobić ?

3 osoby pomagają a reszta ?

 

Podsumowując

Robić posiew lepszą ezą

Stosować rozcieńczenia

Inkubować w atmosferze CO2

 

 

Co zrobić z podejrzaną kolonią 1 ? wysiać ja jeszcze raz ?

[leszcz007]

Co do metody posiewu, to stosu metodę, którą ci wysłał Wiktor. Co 1 to nie ma mowy o kolonii, to jest "murawa" - tego się w ogóle nie analizuje. Zwykle analizę zaczyna się od miejsca, gdzie widać pojedyncze kolonie. Możesz to wysiać raz jeszcze, ale przypuszczam, że efekt będzie podobny. Żeby zminimalizować różnice pomiędzy płytkami. Możesz podzielić daną płytkę na pół (kreska markerem na szkle) z jednej strony posiać to co wiesz, że jest drożdżami, a z drugiej to co podejrzewasz, że jest zakażeniem, będzie się dało porównać.

 

p.s.

Staram się odpowiadać na wszystkie pytania, ale czasami zdarza mi się coś ominąć. Wypunktuj te, na które nie uzyskałeś odpowiedzi.

[mrblaha]

Jeżeli masz dużo płytek to wysiej sobie szereg rozcieńczeń i będziesz wiedział "na potem" jakie rozcieńczenia warto wysiewać.

[bnp]

Leszczu dzięki za pomoc, coś mi się ubzdurało z tymi pytaniami. za dużo chyba piję

 

 

 

jeszcze pytanie o murawę, co to takiego ?

 

 

Czy jest jakaś substancja dodana do pożywki do podłoża, która nie pozwoli rosnąć drożdżom a jedynie bakteriom ?

[Wiktor]

jeszcze pytanie o murawę, co to takiego ?

 

to że masz zamiast pojedynczych kolonii warstwę mikroorganizmów.

 

Czy jest jakaś substancja dodana do pożywki do podłoża, która nie pozwoli rosnąć drożdżom a jedynie bakteriom ?

 

na podłożu z cykloheksymidem nie rosną drożdże - tylko bakterie, ale drogie to i toksyczne dla ludzi...

[bnp]

A coś więcej ? czy to dobrze czy żle ? Pewnie źle, jak tego uniknąć ?

 

Wiktor, źle się wyraziłem, coś tańszego łatwo dostępnego oraz nieszkodliwego

Tak sobie pomyślałem czy z leków na grzybicę/ drożdżycę by coś nie podziałało jako inhibitor http://www.dermatologia24.pl/leki_przeciwgrzybiczne.htm

 

Ubije to drożdże a bakterii nie ? taka luźna myśl

[leszcz007]

A coś więcej ? czy to dobrze czy żle ? Pewnie źle, jak tego uniknąć ?

to ani dobrze, ani źle - po prostu się tego nie analizuje i tyle.

Tak sobie pomyślałem czy z leków na grzybicę/ drożdżycę by coś nie podziałało jako inhibitor http://www.dermatolo...wgrzybiczne.htm

Ubije to drożdże a bakterii nie ? taka luźna myśl

Z lekami to może być różnie, część z nich ma również właściwości bakteriostatyczne. Możesz wypróbować Fluconazol lub pochodne. W aptece sprzedawane między innymi jako Flumycon. Najlepiej było by mieć roztwór do wlewów dożylnych, ale nikt Ci go nie sprzeda (tylko dla szpitali) można kupić syrop - 150ml (5mg/ml) za około 33pln.

"Działa na Blastomyces dermatitidis, Candida albicans oraz inne rodzaje Candida, Coccidioides immitis, Cryptococcus neoformans, Histoplasma capsulatum, Microsporum canis, Trichophyton. Oporność na lek występuje rzadko, jednak stwierdzono niewrażliwe szczepy Candida albicans"

Więc powinno działać też na saccharomyces cerevisiae i nie ma właściwości bakteriostatycznych.

Pozostaje kwestia dawki. W dawkowaniu trzeba by się pobawić - jeżeli chodzi o dawki dla ludzi, to mykostatycznie stosuje się dawkę 50mg/24h/60kg, ale cholera wie jakie to ma przełożenie na warunki hodowlane.

W praktyce laboratoryjnej stosuje się podłoża selektywne dla bakterii, ale musiał bym sprawdzić co w nich jest, bo nie robiłem ich od dłuższego czasu.

[robkiz]

Tu akurat moge pomoc i ja;) Flukonazol ma aktywnosc grzybobójcza wzgledem sacchararomyces cerevisiae przy stezeniu na poziomie 0,03mikrograma na ml.

Ma tez spektrum aktywnosci dosc szerokie i bakterie tez od niego ucierpia choc bakteriobojczy bywa przy stezeniach wyzszych znacznie. Trudno okreslic nie znaja bakterii ale bywa ze jego aktywnosc jest 1000x slabsza wzgledem niektorych.

[leszcz007]

Flukonazol ma aktywnosc grzybobójcza wzgledem sacchararomyces cerevisiae przy stezeniu na poziomie 0,03mikrograma na ml.

takie pytanie, czy na pewno mikrogramy (ug) czy miligramy (mg) i czy chodzi o hodowle na szalkach czy w roztworze? Bo te czasami mogą się różnić.

[robkiz]

Drogi Leszczu natrualnie mikro-, wzgledem bakterii jest natomiast czesciej mili- tak duzy indeks rzeczywiscie wydaje sie byc obiecujacy. Domyslam sie tez ze Twoje pytanie wyniklo z poczucia poprawnosci naukowej a nie z niedowierzania moim umiejetnosciom czytania - żatruje oczywiscie

a hodowle raczej w r-rze ale pewnosci nie mam. Zreszta traktowac nalezy te dane tylko orientacyjnie bo roznia sie znacznie dla roznych drozdzy. W mojej pracy kiedys uzywalem flukonazol przeciw niektorym drozdzom (ale nie Saccharomyces) i aktywnosc sie wachala od 0,1 do 10 a nawet wiecej. Wiec mysle ze trzebaby zrobic test na konkretnych drozdzach dla roznych stezen i sprawdzic poziom chocby orientacyjnie

[leszcz007]

Oczywiście, że z odpowiedzialności naukowej nigdy nie stosowałem Fluconasolu w hodowlach tylko znam go z terapii przeciwgrzybiczych, a tam stężenia są dużo wyższe. W przypadku antybiotyków wychodzi, że stężenia MIC w roztworze są niższe niższe niż na szalkach, stąd też moje drugie pytanie.

[robkiz]

W przypadku antybiotyków wychodzi, że stężenia MIC w roztworze są niższe niższe niż na szalkach, stąd też moje drugie pytanie.

 

No tak, masz racje, jak teraz o tym mysle to wydaje sie byc to nawet oczywiste. Wiekszosc badan ktorych widzialem wyniki to roztwory. Czasem na pozywce robi sie metoda krazkowa wstepne testy ale wartosci MIC sa z roztworow.

 

A zapytam sie glupio jakie bakterie moga byc najbardziej prawdopodobne w takiej warce? oprócz Acetobacter